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从专业角度带您了解HPLC液相色谱仪具体操作步骤

点击次数:390 发布时间:2020-01-14
   HPLC液相色谱仪是应用高效液相色谱原理,主要用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物的仪器设备。它由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中做相对运动时,经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。HPLC广泛应用于生命科学、食品科学、药物研究以及环境研究中。
 

  HPLC液相色谱仪的主要操作步骤:
  1、过滤流动相,根据需要选择不同的滤膜。
  2、对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
  3、打开HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪),连接好流动相管道,连接检测系统。
  4、进入HPLC控制界面主菜单,点击manual,进入手动菜单。
  5、有一段时间没用,或者换了新的流动相,需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵,直接在泵的出水口,用针头抽取。冲洗进样阀,需要在manual菜单下,先点击purge,再点击start,冲洗时速度不要超过10ml/min。
  6、调节流量,初次使用新的流动相,可以先试一下压力,流速越大,压力越大,一般不要超过2000。点击injure,选用合适的流速,点击on,走基线,观察基线的情况。
  7、设计走样方法。点击file,选取selectusersandmethods,可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法,点击newmethod。选取需要的配件,包括进样阀,泵,检测器等,根据需要而不同。选完后,点击protocol。
  一个完整的走样方法需要包括:
  a、进样前的稳流,一般2-5分钟;
  b、基线归零;
  c、进样阀的loading-inject转换;
  d、走样时间,随不同的样品而不同。
  8、进样和进样后操作。选定走样方法,点击start。进样,所有的样品均需过滤。方法走完后,点击postrun,可记录数据和做标记等。全部样品走完后,再用上面的方法走一段基线,洗掉剩余物。
  9、关机时,先关计算机,再关液相色谱。
  10、填写登记本,由负责人签字。
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