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原来高效液相色谱系统是由这五个系统组合而成的

点击次数:152 发布时间:2020-07-30
  高效液相色谱系统主要有进样系统、数据处理系统、输液系统、检测系统和分离系统。
 
  1、进样系统:一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作,进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。
 
  2、数据处理系统:该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作,使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。

  3、高效液相色谱系统中输液系统:该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l.47~4.4x107pa,流速可调且稳定,当高压流动相通过层析柱时,可降低样品在柱中的扩散效应,可加快其在柱中的移动速度,这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存错和梯度仪,可使流动相随固定相和样品的性质而改变,包括改变洗脱液的极性、离子强度、ph值,或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使各种物质都能获得有效分离。
 
  4、检测系统:高效液相色谱常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种。
  a、紫外检测器 该检测器适用于对紫外光(或可见光)有吸收性能样品的检测。其特点:使用面广;灵敏度高;线性范围宽;对温度和流速变化不敏感;可检测梯度溶液洗脱的样品。
  b、示差折光检测器 凡具有与流动相折光率不同的样品组分,均可使用示差折光检测器检测。目前,糖类化合物的检测大多使用此检测系统。这一系统通用性强、操作简单,但灵敏度低(检测下限为10-7g/ml),流动相的变化会引起折光率的变化,因此,它既不适用于痕量分析,也不适用于梯度洗脱样品的检测。
  c、荧光检测器 凡具有荧光的物质,在一定条件下,其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比。因此,这一检测器只适用于具有荧光的有机化合物的测定,其灵敏度很高,痕量分析和梯度洗脱作品的检测均可采用。
 
  5、分离系统:该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。色谱柱一般长度为10~50cm,内径为2~5mm,由不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成,住内装有直径为5~10μm粒度的固定相。固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成,它们都有惰性、多孔性和比表面积大的特点,加之其表面经过机械涂渍,或者用化学法偶联各种基因或配体的有机化合物。因此,这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。例如,在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素(psa)后,就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。 
  另外,固定相基质粒小,柱床极易达到均匀、致密状态,极易降低涡流扩散效应。基质粒度小,微孔浅,样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析,基质粒度小,塔板理论数n就越大。这也进一步证明基质粒度小,会提高分辨率的道理。 再者,高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60c,通过改善传质速度,缩短分析时间,就可增加层析柱的效率。
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