色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。
只有了解影响色谱柱性能的因素,才能结合目标分析物的性质、需要达到的分析效果及实验室条件来选择适合的色谱柱。
(1) 硅胶纯度
硅胶纯度和残留金属离子浓度,硅胶的杂质会影响化合物的峰形,硅胶表面的金属含量高会影响碱性化合物的峰形,易发生拖尾。
(2) 色谱柱尺寸
填料床的长度和内径,增加色谱柱长度,可以在一定程度上提高柱效,但也会升高压力和导致峰展宽;宽柱径,提高载样量,但也会增加横向扩散,同样会导致峰展宽。窄柱径可以节约溶剂,可减少横向扩散,但压力较大,对系统要求较高。
(3) 颗粒形状及粒径
球形颗粒柱效高、重现性好、柱床结构均匀,不规则形柱床结构不均匀、流动相线速度不均匀,容易谱带展宽;平均颗粒直径,粒径越小,柱效越高,柱压也越高。粒径分布越广则柱效越低,压力越大。
(4) 颗粒表面积
颗粒外表面和内部孔表面的总和,以m2/g表示,相对而言高表面积对样品具有较强的保留能力,更大的柱容量和分离度。而低表面积能更快达到平衡状态,更适合梯度洗脱程序。
(5) 孔径
颗粒的孔或腔的平均尺寸,范围是80~300Å,大孔径的填料颗粒可以延长大分子溶质在填料表面的滞留时间,改善分离,所以大孔径填料适合分离大分子化合物或者水动力体积较大的分子。
(6) 键合类型及键合
键合相分子与基体单点相连为单体键合,这种键合方式可以提高传质速率,缩短柱平衡时间,;聚合体键合为键合相分子与基体多点相连,这种键合方式可以增加色谱柱稳定性,增加载样量。而键合相不同会直接影响化合物的保留行为。
(7) 碳覆盖率
碳覆盖率可以提高分辨率和重现性,但分析时间长。
(8) 封端
硅胶键合相填料中有部分未封端的残留硅羟基,如图封端可以减轻待测组分与硅胶表面残留的酸性硅羟基反应,改善保留和峰行,这对于碱性化合物尤其重要。而不同的封端技术也会直接影响色谱柱的效能。