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C18色谱柱从pH指数上面如何进行选择

发布时间:2022-09-14        阅读:197
C18色谱柱因键合方式的不同、粒径的不同、长度的不同,内径的差异等多方面因素,呈现出不同选择性。这样,在市场上就出现了数百种具有不同分离选择特性的C18色谱柱。

对于传统的C18色谱柱,pH值使用范围通常为2~7,因为pH值高于8时C18固定相会受到限制。由于残余硅羟基的存在,易对碱性化合物造成不可逆吸附,造成峰拖尾,影响分离与分析。pH值太低则会使键合的烷基脱落,而且对成分的分离达不到要求。

1、酸性条件下C18的选择

为了改善C18色谱柱在低pH值时的稳定性,有人提出了空间位阻方法。

空间位阻作用是指连接较大基团,立体阻碍溶质基团进攻硅醇基,使硅氧烷能够再生,提高了化学键合固定相抗水解的能力。

还有人制备了侧链中含有异丙基或异丁基的C18化学键合固定相。该固定相由于引入了较大的侧链基团,立体阻碍了残留硅醇基与溶质之间的相互作用,在低pH值条件下能够保持稳定,这种化学键合固定相更适合酸性物质的分离。

Zorbax Stable Bond C18色谱柱就使用了空间位阻技术,其使用单官能团硅烷,具有较大的二异丁基(SB-C18)侧链基团,空间位阻关键的硅氧烷键合到硅胶表面,以避免在低pH值条件下水解破坏,在酸性流动相条件下提供良好的稳定性和重现性。因此,Stable Bond色谱柱成为低pH值方法开发的很好的选择。在方法开发初期,若选定流动相为酸性,可将此类色谱柱作为很好的选择。

2、碱性条件下C18的选择

制造快速分离碱性化合物的化学键合相一直是研究热点。

双齿键合固定相的每个硅烷化分子中含有两个硅原子,两个硅原子之间以-O-或-CH2-CH2等基团连接,每个硅原子含有1个C18官能团。它的环状结构无论在低pH值条件下,还是高pH值条件下均显示了较高的稳定性和满意的柱效。

与传统的单齿化学键合相相比,这种化学键合固定相突出的优点是在低、中、高pH值时都有很好的稳定性。使用C18双齿化学键合固定相的商品柱有Zorbax Extend-C18色谱柱,其耐受pH值达11.5,特别适合在高pH值的流动相条件下对强碱性化合物进行有效的色谱分离。
 

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