上海高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内， 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数， 在两相中作相对运动时， 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程， 各组分在移动速度上产生较大的差别， 被分离成单个组分依次从柱内流出， 通过检测器时， 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱 形式打印出来。
1、过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2、对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3、打开HPLC工作站，连接好流动相管道，连接检测系统。
4、进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5、有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。
6、调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7、设计走样方法。点击file，选取se-lectusersandmethods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击newmethod。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a、进样前的稳流，一般2-5分钟；b、基线归零；c、进样阀的loading-inject转换；d、走样时间，随不同的样品而不同。
8、进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9、关机时，先关计算机，再关液相色谱。
注意事项：
1、流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
2、柱子是非常脆弱的，*做的方法，先不要让液体过柱子。
3、所有过柱子的液体均需严格的过滤。
4、压力不能太大，至好不要超过2000psi。
