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什么是超高效液相色谱仪?它该如何操作?

发布时间:2022-09-26        阅读:300
  超高效液相色谱仪是基于高效液相色谱法的理论及原理,涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术,增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。主要用于各种药物及其制剂的分析测定,尤其是生物样品、中药等复杂体系的成分的分离分析,可对物质进行定量定性分析。超高效液相色谱仪的速度、灵敏度及分离度分别是传统的高效液相色谱仪的9倍、3倍及1.7倍,它缩短了分析时间,同时减少了溶剂用量降低了分析成本。  
 
  目前,超高效液相色谱仪是应用超高效液相色谱原理,主要用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物的仪器设备。可广泛应用于生命科学、食品科学、药物研究以及环境研究中。
 
  超高效液相色谱仪主要优点:
  1.单一波长标准灵敏度、高灵敏度吸收谱。
  2.自动测定D2灯及W灯的开启次数、灯状态、灯点燃时间、灯能量、设定D2灯及W灯状态。
  3.针对复杂混合物中各化合物在不同波长下的响应差异,用时间程序切换波长进行分析,与传统紫外-可见检测器相比,能够极大程度提高所有化合物的测定灵敏度。
  4.超高效液相色谱仪采用进口光电二极管阵列作为光电检测元件,无需任何机械部分调整、选择和改变波长,仪器使用过程中不会引起波长的改变,与常规的单色仪相比有良好的波长准确度和重现性,使得分析结果更加可靠。
 
  超高效液相色谱仪的操作步骤:
  1.过滤流动相,根据需要选择不同的滤膜(0.45um)。
  2.对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
  3.打开HPLC工作站,连接好流动相管道,连接检测系统。
  4.进入HPLC控制界面主菜单,点击manual,进入手动菜单。
  5.有一段时间没用,或者换了新的流动相,需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵,直接在泵的出水口,用针头抽取。冲洗进样阀,需要在manual菜单下,先点击purge,再点击start,冲洗时速度不要超过10ml/min。
  6.调节流量,初次使用新的流动相,可以先试一下压力,流速越大,压力越大,一般不要超过2000。点击injure,选用合适的流速,点击on,走基线,观察基线的情况。
  7.设计走样方法。点击file,选取select users and methods,可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法,点击new method。选取需要的配件,包括进样阀,泵,检测器等,根据需要而不同。选完后,点击protocol。一个完整的走样方法需要包括:
  ①进样前的稳流,一般2-5分钟;
  ②基线归零;
  ③进样阀的loading-inject转换;
  ④走样时间,随不同的样品而不同。
  8.进样和进样后操作。选定走样方法,点击start。进样,所有的样品均需过滤。方法走完后,点击postrun,可记录数据和做标记等。全部样品走完后,再用上面的方法走一段基线,洗掉剩余物。
  9.关机时,先关计算机,再关液相色谱。

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