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色谱工作站的使用要遵守哪些细节

更新时间:2025-11-06        阅读:71
  色谱工作站的规范操作需贯穿“准备-运行-分析-维护”全流程。核心在于细节把控——从流动相脱气到基线平衡,从进样精度到数据处理,每一步均需严格遵循标准流程。同时,需结合具体仪器特性(如Waters Empower的方法组管理、福立工作站的谱图后期处理功能)灵活调整操作策略,以确保数据的可靠性与仪器的稳定性。
  色谱工作站使用细节
  一、开机前准备:确保仪器与样品“双达标”
  流动相制备
  溶剂需用色谱纯级(如甲醇、乙腈),水需为超纯水(电阻率≥18.2 MΩ・cm),避免杂质污染色谱柱或检测器。
  若流动相含缓冲盐(如磷酸盐、醋酸盐),需用0.22 μm滤膜减压抽滤(有机相用有机相滤膜,水相用水相滤膜),防止盐结晶堵塞管路;混合流动相(如甲醇-水=7:3)需先混合再超声脱气5-10分钟,或通过仪器在线脱气机,避免气泡进入泵体导致压力波动、基线噪音。
  样品处理
  样品需溶解于流动相(或与流动相兼容的溶剂),避免沉淀堵塞进样阀或色谱柱;用0.22 μm滤膜过滤样品,去除悬浮杂质;若样品浓度过高,需用流动相稀释至线性范围内(通过标准曲线验证)。
  二、开机与系统平衡:稳定是关键
  开机顺序:遵循“先低后高、先泵后检测器”原则——先打开计算机与色谱工作站,再依次开启输液泵、柱温箱、检测器,避免电路冲击。
  系统平衡判断:紫外检测器基线漂移≤0.01 mAU/h,噪音≤0.005 mAU。若流动相含缓冲盐,需平衡30-60分钟(或20-30柱体积),直至压力、基线无波动再进样。
  三、样品进样与数据采集:精准操作
  进样操作:进样器(如10 μL、20 μL定量环)需提前用样品溶液润洗3-5次,避免残留溶剂影响样品浓度;手动进样时,需“快速切换阀位”(从“Load”到“Inject”),且每次进样速度、力度一致;自动进样器需检查样品瓶密封性,避免溶剂挥发。
  实时监控:进样后观察系统压力、峰形及信号变化。若压力突然升高(超过柱压上限),需立即停泵排查堵塞;若峰形异常(拖尾、分裂),需检查样品污染或色谱柱失效。
  数据采集参数:设置合理的采样频率(如10 Hz)和积分阈值(如0.001 mAU),避免漏峰或积分误差;手动积分时统一起点、终点(如峰高10%处),确保同批次数据一致性。
  四、数据处理与分析:科学严谨
  谱图后期处理:若预设方法无法准确分析样品峰,可通过调整积分参数(如斜率阈值、最小峰面积)优化结果,但不得修改原始数据。
  结果验证:用标准品验证系统适用性——理论塔板数(N)≥2000(反相柱C18),分离度(R)≥1.5,重复性(RSD)≤2%(n=5次进样)。
  报告生成:选择报告格式(如自定义字段、图表组合),导出数据需包含完整实验信息(如流动相组成、色谱柱型号、计算结果等)。
  五、关机维护:延长仪器寿命
  流动相清洗:若流动相含缓冲盐,关机前用过渡流动相冲洗30-40分钟(或30柱体积),再用纯有机相冲洗20-30分钟,防止盐结晶堵塞管路或破坏柱床;若流动相为纯有机相,直接用有机相冲洗15-20分钟即可。
  部件保养:进样阀用甲醇冲洗(Load状态下注入100 μL甲醇,切换阀位冲洗);检测器关闭灯源(氘灯寿命约2000小时,非使用时及时关闭),长期不用时用甲醇擦拭流通池窗口。
  记录与归档:记录仪器使用时间、灯源寿命、色谱柱使用次数等信息,便于后续维护追溯。

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