超快速液相色谱（UHPLC）作为高效液相色谱（HPLC）的升级版，凭借其更高的分离效率、更快的分析速度和更低的溶剂消耗，成为药物研发、环境监测和食品安全等领域的核心工具。然而，其高压、高速的运行特性对操作规范提出了更高要求。本文将结合行业经验与新技术动态，系统梳理UHPLC的使用方法，助您实现高效、精准的分析目标。
一、开机前准备：细节决定成败
1.流动相配置
选择色谱纯溶剂与超纯水，按比例混合后需经0.22μm滤膜真空脱气，避免气泡干扰泵稳定性。例如，反相C18柱常用甲醇-水体系，若含缓冲盐，需现用现配并缓慢调节pH至目标值，防止微生物滋生。
2.色谱柱预处理
新柱启用前需用高比例有机相冲洗30分钟，以激活填料；旧柱再生时采用梯度程序清除残留杂质。若分析糖类等极性物质，需选择氨基柱等专用柱型，并严格匹配流动相极性。
3.样品预处理
固体样品需溶解于与初始流动相组成相近的溶剂中，液体样品需稀释至检测器线性范围内。复杂基质需通过固相萃取（SPE）或蛋白沉淀去除干扰物，所有溶液经离心/过滤后装入自动进样瓶，避免颗粒堵塞管路。
二、系统启动与平衡：稳中求快
1.开机顺序
按“检测器→柱温箱→泵→自动进样器→工作站”顺序启动，等待各模块自检完成。例如，岛津UHPLC系统需通过Bootp Server确认信号连接，再打开工作站软件。
2.流速与压力控制
初始流速设为0.1-0.5 mL/min，逐步升至目标值，避免压力冲击损坏色谱柱。反相色谱需用10-15倍柱体积的流动相平衡系统，梯度方法需延长平衡时间至基线波动≤±1mAU。
三、进样与分析：精准与效率并重
1.进样模式选择
常规样品采用20μL进样量，微量样品可降至1μL；特殊样品启用冷却托盘功能，并采用“partial loop”模式减少交叉污染。自动进样器需设置针内外壁清洗次数（≥3次），防止残留干扰。
2.实时监控与异常处理
密切关注压力曲线：突升可能源于管路堵塞，骤降提示渗漏；保留时间漂移超过±0.1min需排查流速误差。若遇停电，立即关闭高压阀，来电后重新平衡系统再检测。
四、关机与维护：延长设备寿命
1.系统冲洗
分析结束后，先用高比例水相冲洗60分钟，再用纯甲醇封存柱子，防止微生物滋生。缓冲盐流动相需先用水置换干净，避免盐析堵塞管路。
2.定期保养
每月拆洗在线过滤器，超声清洗单向阀球体，更换老化PEEK管段；每200小时更换泵密封垫，进样针弯曲及时更换；季度执行系统适用性测试，确保检测结果法律效力。
五、安全与合规：不可忽视的细节
1.化学品安全
在通风橱中配制有毒或挥发性流动相，佩戴防护眼镜、手套和实验服。废液需分类收集，交由专业机构处理。
2.数据完整性
遵循GLP规范，完整记录原始数据、审计追踪日志；PDF报告需包含方法详情、图谱截图及结论陈述，确保分析结果可追溯。
超快速液相色谱的高效运行离不开对每个环节的精细把控。从流动相的脱气到色谱柱的平衡，从进样模式的优化到异常压力的排查，每一步都需严格遵循规范。通过掌握上述核心步骤与技巧，您不仅能显著提升分析效率，还能最大限度延长设备寿命，为科研与生产提供可靠支持。
