在使用高效液相色谱系统进行日常分析检测的过程中，有时会遇到色谱峰峰面积重现性差的问题，导致无法对组分进行准确定量。出峰面积重现性差的话，首先要看保留时间是否稳定。如果保留时间都不稳定，那也不用说出峰面积的稳定了。而保留时间的稳定性，跟系统的压力、流动相比例、流动相的脱气以及色谱柱都有关系。导致色谱峰峰面积重现性差的常见原因及解决方法：1、检查进样量及进样操作进样量不符合要求或者进样时操作失误，都可能导致色谱峰面积重现性差。如果是使用手动进样器且方法要求进样量小于定量环体积，必...

液相色谱柱的损坏70-80%都是由于柱压升高导致的，色谱柱使用了一段时间以后，压力会有所升高，达到一定程度以后色谱柱就会报废，如果在一天之内压力升高了2-5个mpa，或者在几次使用后压力就翻倍的升高，这些都是异常状况，那建议进行排除。一、色谱柱保存不当原因：色谱柱如较长时间不用，重新启用后需按说明书的活化方法重新活化后再使用，否则也会出现柱压升高，柱效下降。解决办法：按说明书重新活化色谱柱。原因：除另有规定外，一般反相色谱柱都需保存在高比例有机相中，以防止微生物滋生。否则，重...

标准曲线法，分为外标法和内标法。外标法在液相色谱中用的较多。内标法准确但是麻烦，在标准方法中用的较多。1、外标法用被测化合物的纯品作为标准样品，配制成一系列的已知浓度的标样。注入色谱柱的到其响应值（峰面积）。在一定范围内，标样的浓度与响应值之间存在较好的线性关系，即W=f×A，制成标准曲线。在*相同的实验条件下，注入未知样品，得到欲测组分的响应值。根据已知的系数f，即可求出欲测组分的浓度。外标法的优点：操作、计算简单，是一种常用的定量方法；无需各组分都被检出、洗脱；需要标样；...

紫外检测器的使用覆盖面达到HPLC检测器的75%，在各个领域得到了广泛的应用，特别是在药品、环保、生命科学、粮食科学、农业科学、食品科学、医疗卫生等领域，应用更加广泛。国际上生产HPLC的厂商很多，无一不带紫外检测器。中国也有10几家生产HPLC的企业。基本上都带紫外检测器。有的HPLC只有紫外检测器一种，而无其它类型的检测器。紫外检测器不仅灵敏度高、噪音低、线性范围宽、有较好的选择性，而且对环境温度、流动相组成变化和流速波动不太敏感，因此既可用于等度洗脱，也可用于梯度洗脱。...

C18色谱柱因键合方式的不同、粒径的不同、长度的不同，内径的差异等多方面因素，呈现出不同选择性。这样，在市场上就出现了数百种具有不同分离选择特性的C18色谱柱。对于传统的C18色谱柱，pH值使用范围通常为2～7，因为pH值高于8时C18固定相会受到限制。由于残余硅羟基的存在，易对碱性化合物造成不可逆吸附，造成峰拖尾，影响分离与分析。pH值太低则会使键合的烷基脱落，而且对成分的分离达不到要求。1、酸性条件下C18的选择为了改善C18色谱柱在低pH值时的稳定性，有人提出了空间位阻...

紫外检测器（ultraviolet－visibledetector，UVD）是HPLC中应用广泛的检测器之一，几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。其特点是灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于制备，并能与任何检测器串联使用。紫外检测器主要由光源、分光系统、检测池和检测系统四大部分组成，从光源分光系统得到的特定波长的单色光通过检测池时，一部分光被溶液中的吸光性溶质吸收，剩余的透射光到达检测系统后光信号转换成电信号...

色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。只有了解影响色谱柱性能的因素，才能结合目标分析物的性质、需要达到的分析效果及实验室条件来选择适合的色谱柱。(1)硅胶纯度硅胶纯度和残留金属离子浓度，硅胶的杂质会影响化合物的峰形，硅胶表面的金属含量高会影响碱性化合物的峰形，易发生拖尾。(2)色谱柱尺寸填料床的长度和内径，增加色谱柱长度，可以在一定程度上提高柱效，但也会升高压力和导致峰展宽；宽柱径，提高载样量，但也会增加横向扩散，同样会导致峰展宽。窄柱径可以节约...

液相色谱检测器是HPLC仪的三大关键部件之一。检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号。HPLC的检测器要求灵敏度高、噪音低（即对温度、流量等外界变化不敏感）、线性范围宽、重复性好和适用范围广。1、按原理可分为光学检测器（如紫外、荧光、示差折光、蒸发光散射）、热学检测器（如吸附热）、电化学检测器（如极谱、库仑、安培）、电学检测器（电导、介电常数、压电石英频率）、放射性检测器（闪烁计数、电子捕获、氦离子化）以及氢火焰离子化检测器。2、按测量性质可分为通...